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小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的方法步驟介紹

更新時間:2021-07-24點擊次數(shù):1852
  小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有多向分化潛能的干細胞,可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,因此可以作為組織工程中的種子細胞,在適當?shù)臈l件下,骨髓間充質(zhì)干細胞可以分化為三個胚層來源的組織細胞而進行細胞移植的治療,在體外培養(yǎng)擴增后也可種植在生物材料上,回植入機體修復(fù)組織損傷。
  充質(zhì)干細胞在治療組織器官退行性疾病,遺傳缺陷性疾病和基因治療方面也展現(xiàn)了美好的前景,本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能,可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等,采用干冰保存運輸。收到細胞時,若干冰已經(jīng)*融化,請立即將細胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請立即將細胞放入液氮中保存待用,請按條件貯存細胞,切不可將細胞置于高溫環(huán)境。
  方法步驟:
  1、沿著脊髓切開,從身體的軀干解剖后肢,小心不要損傷股骨;
  2、進一步解剖后肢,通過切開膝關(guān)節(jié)來切開每個后肢;從脛骨和股骨中去除肌肉和結(jié)締組織;將骨干刮干凈;
  3、超凈臺操作,切斷骨髓腔末端下方的脛骨和股骨的末端;將裝有完整培養(yǎng)基的10 ml注射器上的27號針頭插入通過移除生長板暴露的海綿狀骨中,用1ml*培養(yǎng)基將骨髓塞從骨頭切開的末端沖洗出來,收集在冰上的10ml管中。
  4、小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞通過70mm過濾網(wǎng)過濾細胞懸液,以去除任何骨針或肌肉和細胞團塊; 通過臺盼藍排除法測定細胞的產(chǎn)量和活力,并在血細胞計數(shù)器上計數(shù)。
  5、在95mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)BM細胞,在1ml*培養(yǎng)基中,密度為25×106個/mL細胞(基于步驟4中獲得的細胞計數(shù));3h后更換新的*培養(yǎng)基。
  6、再培養(yǎng)8小時后,用1.5ml新鮮的*培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基;此后,每8小時重復(fù)該步驟,直至72小時的初始培養(yǎng)。
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